1．培养应从女性阴道深处和宫颈及男性尿道取材，取材时以藻酸钙拭子较好，棉拭子因可能含抑制支原体生长的酸性物质而多不采用，取材后宜直接接种于生长培养基上。培养基中加入青霉素或醋酸铊来抑制杂菌生长，但可能抑制某些UU株。国外已有商品化培养基供应。
支原体的初步鉴定包括特征性的“煎蛋样”菌落及Dienes染色观察。生化试验主要有精氨酸水解试验和糖发酵试验。特异的鉴定方法是血清学试验，如琼脂生长抑制试验、代谢抑制试验或补体依赖的杀支原体试验。近来也有用表面免疫荧光或免疫酶法直接对菌落进行鉴定，这样即使是菌落中混有多种血清型的支原体也能识别出来。
2．血清学诊断试验较早应用的血清学方法有补体结合试验及间接血凝试验等，存在不够敏感和特异的缺点。酶联免疫吸附试验(ELISA)敏感性高，可检测类似特异性抗体。大多数非淋菌性尿道炎(NGu)患者可以测得uu抗体，急性期和恢复期血清效价有差别。微量免疫荧光法具有快速、重复性好、较少有交叉反应性的特点，间接微量免疫荧光法(MIF)玻片试验已用来测定MG抗体及男性NGu和输卵管炎患者的血清抗体反应。
3．分子生物学方法用于临床试验的有多种DNA探针。近来PCR得以开展，有人利用MG粘附蛋白(adhesin)基因DNA序列为引物进行PCR，具有研究或临床诊断的价值。
