梅毒病程长，病症复杂和很多其他疾病 表现相似，故此必须结合病史、临床表现及实验室检查，综合分析。必要时追踪观察和进行试验治疗。
1.病史：性乱史（时间及性伴情况），配偶情况，先天梅毒应询问其父母及兄弟姐妹情况。
2.体检：系统全面，注意皮肤，粘膜，特别是掌、跖，阴部及肛门损害。
3.实验室检查：
3.1梅毒螺旋体检查：（1）暗视野：适用于硬下疳、扁平湿疣及粘膜斑；（2）涂片染色：常用镀银染色，螺旋体染为棕黑色；（3）直接荧光抗体法：取病损表面血清涂片干燥后，加兔抗人螺旋体荧光抗体，在荧光显微镜下观察，梅毒螺旋体呈现亮绿色荧光，其他种类螺旋体无荧光，本法特异性高，但实验室条件要求高。
3.2梅毒血清学实验，梅毒螺旋体感染人体后，可发生两种抗体。（1）非提异性抗心脂质抗体（可用牛心脂质抗原检测出），此称非梅毒螺旋体抗原血清反应。（2）抗梅毒螺旋体抗体，可用梅毒螺旋体（活的或死的梅毒螺旋体及其成分）检测出来，此称梅毒螺旋体抗原血清反应，是检测梅毒的特异性反应，其敏感性及特异性均高，用作证实，确诊，但费用高，需较高的设备条件。但即使患者经足够的抗梅治疗后，血清反应亦不阴转或滴度降低，故不适用于疗效观察、复发及再感染的判断。
常用的非特异性抗原血清反应有：
（1）性病研究室玻片实验（Venereal Disease Laboratory Slide Test，VDRL）；
（2）血清不加热反应素实验（Unheated Serum Reagin，USR）；
（3）快速血浆反应素环状卡实验（Rapid Plasmareagin Cirde Test，RPR）等；
常用的梅毒螺旋体抗原血清反应有：
(1)荧光螺旋体抗体血清实验（Fluorescent Treponemal Antibody-absorption Test，FTA-ABS Test）；
(2)梅毒螺旋体血凝实验（Treponema Pallidurm Hemagglutination Assay，TPHA）；
(3)酶联免疫吸附试验（ELISA）等。
临床上怀疑梅毒螺旋体感染时，一般先用USR或RPR做筛选，如果阴性时即可否定梅毒，只有在怀疑梅毒可能性极大时才进一步检查。如呈阳性，且病史及体检符合梅毒即可确诊。病史及体检不符合梅毒，需进一步做特异性血清反应如FTA-ABS TEST以除外生物学假阳性。
3.3脑脊液检查：以除外神经梅毒（细胞计数，总蛋白测定，VDRL TEST 及胶体金曲线）。
